Biosharp ROS活性氧检测试剂盒

产品简介：

活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针H2DCFDA进行活性氧检测的试剂盒。H2DCFDA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH，而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很*被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。根据活细胞中荧光的产生，可以判断细胞活性氧的含量和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种经典的组织或活细胞中活性氧检测方法。

本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup，以便于活性氧的检测。Rosup是一种活性氧阳性诱导药物，浓度为50mg/mL，根据其荧光信号强度，可分析活性氧的实际水平。

本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。

本试剂盒可以测定1000个样品（以96孔板为标准）。
注意事项：

1、  探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

2、  阳性对照Rosup一般使用浓度为100μM（推荐浓度100-400μM，具体依细胞类型而定）。通常刺激后0.5-4h可观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30 min内观察不到活性氧的升高，可延长诱导时间或适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快，可缩短诱导时间或适当降低活性氧阳性对照的浓度。

3、  对于某些特别的细胞，实验过程中如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强， 可以按照1:2000-1:5000稀释H2DCFDA，使H2DCFDA的终浓度为2-5μM，浓度过高*出现非特异性染色。探针装载的时间也可以根据情况在15-60 min内适当进行调整。

4、  活性氧阳性对照（Rosup）仅仅用于作为阳性对照的样品，其他正常实验样品*加入。

5、  探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。DCF的激发光谱和发射光谱请参考上页图谱。

6、  尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（刺激时间除外），因为探针*氧化，导致本底荧光值升高，所以建议工作液现用现配，以减少各种可能的误差。

7、  如需定量，需要制作标准曲线。通过测定不同浓度的H2O2氧化DCFA的荧光值做标准曲线，X轴为H2O2浓度，y轴是荧光值。根据样品的荧光值即Y值，计算X值即对应的H2O2浓度。

8、  实验组荧光值不高可能是因为有的细胞在装载探针后细胞*漂起来，洗细胞时实验组会吸走一部分细胞。所以在种细胞时可以把细胞量增加一倍，这样细胞紧密连接，贴壁比较牢，实验组的荧光值就高了。

9、  为了您的*和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。



保存条件：

-20℃避光保存，有效期一年。